原位雜交：
原位雜交是指用特定探針定位、檢測DNA、RNA的一種有效的實驗方法，通過把特點序列客隆到特殊載體上，通過轉錄酶反轉一條天然的RNA探針，將探針和切片樣品進行雜交，通過一系列顯色方法，來確定RNA或者DNA表達區域；本中心原位雜交探針采用的是第高辛和生物素標記，靈敏度和同位素相當。 我們采用roche標記及顯色試劑盒，GISH/ISH/FISH按照探針進行收費，每個試劑盒每條探針可以雜交60-80張玻片，收費為1萬5千元，GISH雜交因需要加抗淬滅劑每條探針收費為1萬9千元。量大優惠！
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理，5體節到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
原位雜交第二天
1.
1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。
3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
2.
1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。
2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。
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